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病毒包装服务

一、AAV病毒包装

简介

腺相关病毒(AAV)是一种人细小病毒,目前因为能作为一种基因治疗载体而受到广泛关注。构建重组AAV(rAAV)涉及到用一个目的基因替换病毒基因组的大部分,然后将这个重组基因组包装到一个有感染性的病毒颗粒里。目前大多数生成rAAV的实验方案需要共转染一个载体质粒和一个表达病毒复制和结构基因的包装质粒到腺病毒(Ad)感染的培养细胞中。由于其安全性好、宿主细胞范围广、免疫源性低及在体内表达外源基因时间长等优点,在世界范围内的基因治疗和疫苗研究中得到广泛应用,被视为最有前途的基因转移载体之一。在医学研究中,重组AAV被用于多种疾病的基因治疗的研究(包括体内、体外实验);同时作为一种有特点的基因转移载体,还广泛用于基因功能研究、构建疾病模型,制备基因敲除鼠等方面。

目前已发现的AAV至少有十几种血清型,各种血清型AAV对不同组织和细胞的感染效率不同。

血清型及其组织亲和性:

  1. ● AAV1 肌肉,神经组织,心脏,骨骼肌
  2. ● AAV2 肌肉,中枢神经,肝脏,脑组织,眼
  3. ● AAV5 中枢神经,肺,眼,胰腺
  4. ● AAV6 肺,心脏
  5. ● AAV8 中枢神经,肝脏,眼,肌肉
  6. ● AAV9 肌肉,中枢神经,心脏,肺(肺泡),肝脏
  7. ● 混合型 肌肉,中枢神经,视网膜,肝脏,肺,肾脏

优势:

  1. ● 广泛用于体内实验研究(定点注射与整体注射);
  2. ● 感染范围广,可以用于神经系统、眼睛、心肌、肝脏、肌肉和肺部定位注射;
  3. ● 免疫原性低,极少发生非特异反应和免疫抑制,适合于进行基因治疗研究;
  4. ● 表达稳定,滴度高,颗粒小,扩散能力强;
  5. ● 非整合,安全性高;
  6. ● 标记基因可采用CMV 启动子表达,稳定高效;
  7. ● EGFP、mCherry, Luciferas, eGFP-Luciferase等荧光蛋白可选

服务流程

1、载体设计和构建

  1. ● 客户提供靶基因NCBI登录号
  2. ● 对靶基因序列测序验证
  3. ● 构建腺相关病毒表达载体,测序验证

2、AAV病毒包装采用三质粒系统进行包装,共转染后通过对细胞裂解物进行密度梯度离心纯化和收集病毒。

3、腺相关病毒滴度检测

检测方法:定量PCR检测病毒基因组中的外源DNA拷贝数

病毒规格及价格

病毒规格 提供量 赠送阴性对照 原价 现价
10^12 VG/ml 1 ml 0.2 ml 12000 元 10000 元

 

二、腺病毒包装

简介:

腺病毒是直径约80-120nm的无包膜的线性双链DNA病毒,可迅速感染分裂和非分裂期细胞,与细胞表面受体结合后通过内吞作用进入细胞,在细胞核孔附近聚集,并在感染后2h将腺病毒的DNA释放到细胞核中并开始蛋白表达。通过对野生腺病毒进行改造,保留包装信号序列,去除病毒蛋白的编码序列,不仅增加外源基因的装载容量,而且降低细胞毒性和机体免疫反应,从而获得安全性更高的基因导入系统。

腺病毒包装系统的特点:不整合到宿主细胞基因组,无插入致突变性;可进行有效扩增,获得高滴度高纯度的腺病毒。

服务流程:

1、过表达腺病毒包装:

  1. ● 客户提供靶基因NCBI登录号
  2. ● 对靶基因序列测序验证
  3. ● 构建真核表达载体,测序验证
  4. ● 重组构建腺病毒表达载体,测序验证
  5. ● 腺病毒载体线性化转染,293细胞包装
  6. ● 根据客户需求进行腺病毒扩增纯化

2、干扰腺病毒包装:

  1. ● 客户提供靶点信息
  2. ● 构建干扰RNA载体,测序验证
  3. ● 重组构建腺病毒载体,测序验证
  4. ● 腺病毒载体线性化转染,293T细胞包装
  5. ● 根据客户需求进行腺病毒扩增纯化

病毒规格及价格:

1、单靶点干扰腺病毒包装(1ml)

  10^8-9 10^10 10^11 3靶点筛选套餐
原价 8000 10000 12000 30000
现价 6000 8000 10000 25000

2、过表达腺病毒包装(1ml)

  10^8-9 10^10 10^11
原价 7000 10000 15000
现价 6000 9000 12000

3、规格

腺病毒种类 客户提供 病毒规格 提供量 赠送
阴性对照
过表达腺病毒 基因NCBI登陆号 低滴度10^8-10^9 IU/ml 1 ml 0.2 ml
高滴度10^10 IU/ml 1 ml 0.2 ml
高滴度10^11-10^12 IU/ml 1 ml 0.2ml
高纯滴度10^11-10^12 IU/ml(动物体内) 1 ml 0.2ml
干扰腺病毒 待干扰基因的NCBI登陆号
及靶点序列信息
低滴度10^8-10^9 IU/ml 1 ml 0.2ml
高滴度10^10IU/ml 1 ml 0.2ml
高滴度10^11-10^12 IU/ml 1 ml 0.2ml
高纯滴度10^11-10^12 IU/ml(动物体内) 1 ml 0.2ml

 

三、慢病毒包装

简介:

慢病毒属于逆转录病毒科,名称源自该种病毒长达数年的潜伏期,其中最为人所知的是人类免疫缺陷病毒(HIV-1)。HIV-1直径约120nm,含两条正链RNA,可有效的进入细胞核中,对分裂期细胞及非分裂期细胞均具有很高的感染效率。对以HIV-1为基础进行的慢病毒载体的改造,主要是去除致病基因减少辅助质粒与载体质粒的同源性,最终体现在滴度、生物安全性和外源基因表达效率上的提高。

慢病毒包装系统特点:可通过顺式作用元件将携带的基因运送到细胞核,将要表达的基因序列整合到细胞基因组中,后续可以通过筛选稳转株获得持续稳定的高表达。

服务流程:

1、过表达腺病毒包装:

  1. ● 客户提供靶基因NCBI登录号
  2. ● 对靶基因序列测序验证
  3. ● 构建真核表达载体,测序验证
  4. ● 构建慢病毒表达载体,测序验证
  5. ● 慢病毒载与辅助质粒共转染293T细胞进行慢病毒包装

2、干扰腺病毒包装:

  1. ● 客户提供靶点信息
  2. ● 构建干扰RNA载体,测序验证
  3. ● 构建慢病毒载体,测序验证
  4. ● 慢病毒载与辅助质粒共转染293T细胞进行慢病毒包装

病毒规格及价格:

1、干扰慢病毒包装(1ml)

  单靶 3个靶 筛选套餐 稳转株 稳转套餐
原价 6000 18000 20000 10000 28000
现价 3000 9000 15000 5000 20000

2、过表达慢病毒包装(1ml)

  目的基因<1.5K 1.5-2.5K 2.5-3.5K 稳转株 稳转套餐
原价 8000 10000 15000 10000 18000
现价 6000 9000 12000 5000 15000

3、病毒提供规格

  客户提供 病毒规格 提供量 赠送阴性对照
过表达慢病毒 过表达基因NCBI登陆号 10^7-10^8 TU/ml 1 ml 0.2 ml
干扰慢病毒 待干扰基因的NCBI登陆号及靶点序列信息 10^7-10^8 TU/ml 1 ml 0.2 ml